DNA測序建庫的核心目標,是在最小化樣本損耗的前提下,獲得覆蓋均勻、無序列偏差、適配不同測序平臺的文庫分子,而TLX DNA-seq Kit正是圍繞這一目標,對建庫全鏈路的每個環節做了針對性設計,其作用覆蓋從原始樣本到測序-ready文庫的全流程,原理則體現在對不同樣本類型、不同建庫需求的精準適配上。
TLX DNA-seq Kit第一個核心作用是完成原始樣本到建庫模板的高效轉化,對應的原理是適配性的核酸捕獲體系。針對不同來源、不同質量的核酸樣本,該Kit設計了差異化的純化方案:針對低豐度的循環腫瘤DNA、宏基因組環境樣本等微量核酸,通過優化的磁珠結合體系和低損耗的轉移流程,大程度減少樣本在純化環節的損失,避免低豐度靶標被遺漏;針對FFPE病理樣本、古DNA等降解類樣本,采用了溫和的純化條件,優先保留短片段核酸,避免長片段核酸的非特異性吸附,保證降解樣本也能獲得足夠長度的建庫模板,從源頭解決了不同樣本類型的建庫適配難題。
第二個核心作用是將核酸精準轉化為帶測序接頭的文庫分子,對應的原理是低偏好的酶促反應體系。建庫過程中的末端修復、A尾添加、接頭連接三個核心反應環節,傳統方法往往容易出現堿基偏好、接頭二聚體過多的問題,該Kit采用了高保真的末端修復酶和連接酶,保證核酸末端的精準修飾,避免堿基偏好;同時接頭采用了獨特的結構設計,大幅降低了同源接頭的自連概率,針對微量樣本優化了連接反應的緩沖體系,提升了接頭連接效率,減少了后續PCR擴增的循環數,從反應源頭降低了擴增帶來的序列偏差。
第三個核心作用是輸出可直接上機的合格文庫,對應的原理是多梯度純化篩選體系。TLX DNA-seq Kit采用了兩步梯度純化的磁珠體系,可以根據目標文庫的片段大小精準篩選,有效去除反應殘余、未連接的接頭、過短的降解片段等雜質,在減少有效文庫損失的同時保證文庫的純度,且純化后的文庫無需復雜的質控調整,就能直接適配Illumina、華大智造等主流測序平臺的上機要求,大幅簡化了建庫后的處理流程。整體來看,該Kit的作用是整合了傳統建庫的多步操作,通過全流程的試劑和條件優化,解決了不同樣本建庫的痛點,最終實現穩定、高效、低偏差的建庫效果。
